邁迪安可凍干糞便直擴qPCR/RT-qPCR預混液中含有優(yōu)化的添加劑,對糞便樣本中存在的抑制物有更強的耐受性,同時可保持病人樣本的質(zhì)量和完整性。該試劑可以兼容各種凍干條件,通過通過干燥開發(fā)常溫穩(wěn)定的檢測。其即用型的優(yōu)化配方,可以減少額外的優(yōu)化步驟,只需要加入特異性引物探針即可。
Lyo-Ready™ 可凍干糞便直擴qPCR /RT-qPCR 預混液是不含甘油、4x濃度、含有凍干賦形劑的優(yōu)化配方,適用于從糞便樣本中直接進行靈敏地DNA 或RNA檢測。能夠簡化糞便DNA/RNA檢測的研發(fā),縮短樣本處理檢測周轉(zhuǎn)時間,簡化糞便DNA/RNA檢測的研發(fā),可兼容凍干,常溫下保質(zhì)期更長,減少冷鏈儲運成本。
適用于液體或者凍干體系——擴增效率不受任何影響
A) 使用可凍干糞便直擴qPCR預混液(MDX142)對20%人工糞便樣本中10倍連續(xù)稀釋的DNA樣本(分別為10,000,1,000, 100 和10個拷貝) 直接擴增
B) 使用可凍干糞便直擴RT-qPCR預混液(MDX143)對5%人工糞便樣本中10倍連續(xù)稀釋的RNA樣本(分別為10,000,1,000, 100 和10個拷貝) 直接擴增對比液體體系(藍色)和凍干干燥后的體系(紅色),結(jié)果顯示凍干體系具有和液體體系相同的靈敏度和可重復性
在標準和快速反應循環(huán)設(shè)置下的高效性能——檢測更靈活、周轉(zhuǎn)時間更短
使用可凍干糞便直擴qPCR預混液(MDX142)對6.6 mg/mL人體糞便中的兩個哺乳動物DNA靶標(紅色)進行擴增。反應在QuantstudioTM 7 Flex Real-Time PCR儀上,分別使用標準循環(huán)和快速循環(huán)兩種設(shè)置進行。結(jié)果顯示,在標準和快速循環(huán)的擴增條件下,可凍干糞便直擴qPCR預混液都有相同的擴增效率和熒光強度,檢測的靈敏度和可重現(xiàn)性均保持一致。
標準循環(huán):95°C 3分鐘,95°C 10秒,60°C 30秒,40個循環(huán);
快速循環(huán):95°C 3分鐘,95°C 1秒, 60 °C 1秒,40個循環(huán)。
凍后常溫穩(wěn)定性長達12個月以上
將可凍干糞便直擴qPCR/RT-qPCR預混液干燥后進行加速熱穩(wěn)定性實驗。試劑干燥后(紅色)在 37 C 保存4周,與新鮮液體試劑(藍色)進行對比: (A) 20%糞便樣本的 qPCR檢測 (B) 5%糞便樣本的RT-qPCR檢測。結(jié)果顯示,凍干后試劑與液體試劑具有一致的活性 (<0.5 ΔCt)。凍干后試劑在常溫下可保持穩(wěn)定性至少12個月以上。
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