一提到ELISA,各位做科研的小伙伴都很熟悉,不就是簡單的抗原抗體反應(yīng)嘛?但這“簡單的免疫反應(yīng)",往往在實際操作中一個不小心,結(jié)果就會相差甚遠(yuǎn),甚至功虧一簣,假陽性或者假陰性會讓人焦頭爛額,那么,到底要怎樣快速有效的得到可靠的ELISA結(jié)果呢?
今天小編給大家?guī)淼氖且患椅挥诘聡膶I(yè)生產(chǎn)免疫優(yōu)化試劑的公司-——candor bioscience,它專注于ELISA各個環(huán)節(jié)中的試劑,為廣大研究者提供超過50種不同類型的產(chǎn)品,包括優(yōu)化試劑,封閉試劑,穩(wěn)定劑和免疫實驗緩沖液。通過使用這些試劑,可以幫助您提高實驗結(jié)果的可靠性,簡化實驗步驟,減少實驗時間。
接下來,小編將通過Sandwich-ELISA的實驗過程像大家展示candor bioscience優(yōu)質(zhì)ELISA產(chǎn)品在實驗中的應(yīng)用。
第一步,抗體的包被:
用Coating Buffer 1x(貨號120/121)將抗體稀釋至0.1 - 10 µg/mL。在酶標(biāo)板反應(yīng)孔中加100-150 µL包被好的抗體,4℃孵育過夜或室溫孵育1-4 h。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用Washing Buffer 1x (Washing Buffer 10x TRIS, 貨號145)洗板3 -5次,每次3 min。
第二步,封閉與穩(wěn)定:
用表面封閉劑來充填空隙,從而排除ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。推薦使用的表面封閉劑如The Blocking Solution(貨號110),SmartBlock™(貨號113),BSA-Block(貨號115)。每個空中加入200 µl的表面封閉劑,室溫孵育1-2 h后,棄去孔內(nèi)溶液,用Washing Buffer 1x (Washing Buffer 10x TRIS, 貨號145)洗板3 -5次,每次3 min。
如果想保持ELISA板包被狀態(tài)的長期穩(wěn)定,這個步驟就是必選的??梢赃x用Liquid Plate Sealer®(貨號160)進(jìn)行ELISA板的穩(wěn)定,向每個孔中加入200 µl的Liquid Plate Sealer®,室溫孵育15-90 min,棄去孔內(nèi)溶液,在37-45 ℃條件下干燥1-2 h,這樣處理后的板子放在密封袋中,在干燥、2-8 ℃的環(huán)境中保存1-3 年的時間。
第三步,添加樣品或校準(zhǔn)液(雙重測量):
在孔中加入100-150 µL用樣品稀釋液稀釋后的樣品以及標(biāo)準(zhǔn)液,室溫孵育30 min,棄去孔內(nèi)溶液,用Washing Buffer 1x (Washing Buffer 10x TRIS, 貨號145)洗板3 -5次,每次3 min。
推薦使用candor bioscience優(yōu)質(zhì)buffer:
1. LowCross-Buffer®(貨號100),有助于減少交叉反應(yīng)、基質(zhì)效應(yīng)和非特異性結(jié)合等干擾。將干擾降到zui低,提升了分析的質(zhì)量與結(jié)果的可靠性。
2. Sample Buffer(貨號105),適合在無干擾的情況下使用。
3. Antibody Stabilizer(貨號130/131),可以在2-8°C下長期儲存蛋白質(zhì)或抗體的穩(wěn)定劑
第四步,加入標(biāo)記抗體并檢測:
向每個孔中加入100-150 µl的標(biāo)記抗體(HRP,辣根過氧化物酶;AP、堿性磷酸酶等),室溫孵育2-4 h,棄去孔內(nèi)溶液,用Washing Buffer 1x (Washing Buffer 10x TRIS, 貨號145)洗板3 -5次,每次3 min,進(jìn)行底物檢測(如過氧化物酶的TMB)。
推薦使用candor bioscience優(yōu)質(zhì)buffer:
1.HRP-Protector™(貨號222), 用于在2-8℃長期保存HRP-結(jié)合物。
2. AP-Protector®(貨號235),用于2-8℃長期保存AP-結(jié)合物,還可直接用于AP偶聯(lián)物的培養(yǎng)。
3. LowCross® HRP-Stab(貨號270),用于在2-8℃長期保存HRP結(jié)合物,可以最大限度地減少非特異性結(jié)合、交叉反應(yīng)和基質(zhì)效應(yīng),中和干擾(包括 HAMA 的衍生干擾)。
4. LowCross-Buffer®(貨號100),有助于減少交叉反應(yīng)、基質(zhì)效應(yīng)和非特異性結(jié)合等干擾。將干擾降到zui低,提升了分析的質(zhì)量與結(jié)果的可靠性。
5. Sample Buffer(貨號105),適合在無干擾的情況下使用。
了解更多詳情,
請掃描下方二維碼,
關(guān)注百奧創(chuàng)新公眾號!